碘化丙啶(PI)溶液（50ug/ml）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

碘化丙啶（PI）是一種核酸熒光染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但能夠透過(guò)死細(xì)胞和凋亡中晚期細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染色。因此，PI 作為熒光探針常用于細(xì)胞凋亡（apoptosis）或細(xì)胞壞死（necrosis） 的檢測(cè)。在流式細(xì)胞分析中，PI 常與其他染料如Calcein-AM、Hoechst 33258 或Hoechst 33342 聯(lián)合使用，來(lái)區(qū)分凋亡早晚期細(xì)胞以及死細(xì)胞。此外，PI 也常作為多色熒光染色的復(fù)染劑使用。

產(chǎn)品描述:

本產(chǎn)品為液體(1X)，已經(jīng)過(guò) 0.1μm過(guò)濾，不含細(xì)菌、支原體等。

規(guī)格:10mL/支

有效期: 12個(gè)月

儲(chǔ)存條件：-20℃

運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸

使用說(shuō)明

1. 用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析；

2. 常被用來(lái)與 Calcein, AM、Hoechst 33258 或 Hoechst 33342 等一起使用，能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。

操作步驟

操作步驟（僅供參考）：

細(xì)胞樣品的制備：

(1) 貼壁細(xì)胞：

① 收集上述細(xì)胞懸液到離心管內(nèi)。

② 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。小心吸取上清并丟棄，可留大約 50ul 培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞，

③ 加入約1ml 提前預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至 1.5ml 無(wú)菌離心管。

④ 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50ulPBS，以免吸走細(xì)胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

(2) 懸浮細(xì)胞：

① 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50ul 培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞。

③ 加入約1ml提前預(yù)冷的 PBS, 重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至 1.5ml 無(wú)菌離心管。

④ 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50ul PBS， 以免吸走細(xì)胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

細(xì)胞的固定：加入1ml冰浴預(yù)冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃條件下        

固定2h或更長(zhǎng)時(shí)間。4C固定 12~24h 可能效果更佳。

（3）細(xì)胞的清洗：

① 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 ul 溶液，以免吸走細(xì)胞

③ 加入約1ml 提前預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至1.5ml 無(wú)菌離心管。

④ 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50ul PBS,以免吸走細(xì)胞。

（4）PI染色：在每個(gè)待檢細(xì)胞樣品中加入 500ul 配制好的PI染色工作液，輕輕重懸細(xì)胞沉淀，置于37℃避光水浴 30min.

（5）檢測(cè)與分析：用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng) 488nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞 DNA或 RNA 含量分析和光散射分析。

注意事項(xiàng)

1、熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡快檢測(cè)。

2、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

3、在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過(guò)程中，對(duì)于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長(zhǎng)離心時(shí)間。

4、如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞調(diào)亡檢測(cè)，則必須把組織消化后，制備成單細(xì)胞懸液，才可以進(jìn)行檢測(cè)，

5、可溶于水或 DMSO。本品用 DMSO 溶解，因 DMSO的熔點(diǎn)是 18.5℃，使用前請(qǐng)放置到室溫充分溶解。

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